目的：间歇驱动之后观察大鼠的基础基底外侧核（BLA）中的c-fos蛋白质表达的变化，而穿着的重量游泳，探索蛋白表达机制C- fos诱发间歇性游泳训练。法：建立间歇游泳重量大鼠模型：训练后立即在大鼠BLA中进行c-fos蛋白表达，0.5小时，1小时，2小时通过ABC的免疫组织化学检测4小时。于分析图像和数据的统计软件。果：对照组c-fos阳性BLA神经元分散少量，模型组显着增加并随时间增加（0.5 h <1 h <2 h），达到最大值2小时该组有非常显着的差异（p <0.01），然后逐渐下降。论：间歇性负重游泳训练可以正向调节大鼠BLAs中c-fos蛋白的表达，这可能具有一定的时间效应，这种机制可能与其相关。歇性运动引起的神经细胞钙离子浓度。歇性训练;桂花树的基底侧核;蛋白质c-fos;大鼠分类号：G804.5文献代码：A文章编号：1007-3612（2008）10-1357-04间歇游泳运动对所述蛋白的c-fos的杏仁核大鼠基底外侧核表达俞Fang1张安ming2王庚shen3，王晓yang3（1.实验运动学，中国北方的大学，太原030051，中国山西的中心;2.Université体育，烟台，烟台264005大学，山东中国;3.Université体育，山西大学，太原030006，山西中国）摘要：目的研究c-fos蛋白的表达机制观察间歇性游泳运动后基底外侧大鼠杏仁核（BLA）中c-fos蛋白的变化趋势。法：建立间歇游泳练习模式和检测的c-fos蛋白的表达在BLA在时间0小时，0.5小时，1个小时，2小时，行使MetOH SABC免疫后4小时然后，使用图像分析系统和统计软件分析图像和数据结果：对照组的几个Fos 神经元分散在BLA中，而游泳组表达自己随着时间的推移显着增加并逐渐增加（0.5小时<1小时<2）。h），Fos 神经元峰值出现在2h，与对照组比较有显着性差异（P <0.01），然后稳定下降。论：间歇游泳运动增加的c-fos蛋白的表达在BLA和机制负责改变神经细胞关键词细胞内钙的浓度：间歇性运动，杏仁核的基底外侧核（ BLA），c-fos蛋白，大鼠，许多研究表明在长期适当训练可以有效地避免或延迟的各种症状和老化引起的神经系统的功能的退行性变化，促进神经元再生[1 〜3]，也可以诱导了许多有关的神经活动，突触结构，神经元可塑性和其它相关基因它促进神经生长，调控和保护基因，并且具有对大脑皮层的形态结构良好的影响从而提高学习能力和记忆力[4-7]。些研究人员认为，c-fos原癌基因参与了生物化学和神经结构的长期变化，并认为这些变化是学习和记忆的基础[8]。癌基因的c-fos，也称为快速响应基因或立即早期基因的特征在于细胞外刺激的快速诱导，并且被认为在中枢神经系统[9-10]的最有代表性的立即早期基因。产物表达的mRNA和核磷蛋白（P55C-fos的，简写的Fos）位于神经元的细胞质或细胞核和是神经元激发水平的客观指标，其通常被认为是作为因子转录本和神经活性标记[11]]。同的生理和心理刺激，如压力，针灸或神经肽可以诱导c-fos的表达[12]。为特殊应激源的运动对蛋白质c-fos的表达具有显着影响。年来，已经报道了在体育训练期间大脑中c-fos基因表达的变化，但是对某一核组的研究很少。底外侧杏仁核（BLA）是最大的核组桂花树芯，其被分为两个核：外芯桂花树木，基底核和细胞核副基底。BLA区包含大量穿透和传出纤维，在情绪相关的学习和记忆中起重要作用[13]。用SAB免疫组织化学方法检测大鼠AB中c-fos蛋白的表达，探讨c-fos在AB后不同时间表达的表达模式及其表达机制。歇训练，为运动训练和康复提供理论依据。据。料和方法动物和组雄性大鼠SD（由山西医科大学动物实验中心提供）36，健康，3个月大，体重220-250g。机分为对照组（n = 6）和间歇性运动组（n = 30）。齿动物的标准食物，免费饮用水，可自由移动。境温度（20±5）°C，湿度45％±10％，每天14小时。动物适应环境3天并记录它们的重量。泳训练模型玻璃钢游泳条件，游泳池尺寸150厘米×70厘米×60厘米，水深60厘米，水温控制在（34±3）°C游泳项目适应性游泳持续3天，每天一次，15分钟，20分钟，30分钟，消除那些不擅长游泳的人。后开始正式的游泳训练，每周训练6次，持续6周。重为体重的5％，游泳6分钟，休息4分钟，每天连续进行10组。照组没有运动，没有常规饮食，也没有自由活动。
建模结束时，在0.5小时，1小时，2小时和4小时后立即进行切割。先，给麻醉的动物（35至50毫克/千克体重）腹腔注射0.2％戊巴比妥钠，打开胸腔，将针头插入从心尖升高的主动脉，然后快速切开右心耳并填充至400毫升。用预先冷却的盐水溶液冲洗血管，然后用200％4％多聚甲醛快速输注，然后用300％4％多聚甲醛减速，预固定，然后用PBS至10％蔗糖300ml。到肝脏变得坚硬和白色。
后，将头部快速熄灭，将头部置于冰盘上，打开颅腔，暴露整个脑，将其取出并在4％多聚甲醛溶液中固定2分钟。h，然后浸入PBS中的20％蔗糖溶液中，在4℃下过夜，进行组织。旦完全压下块，用低温恒温器连续切割晶片，厚度为40μm。验仪器使用TD-1508A旋转冰切片机。ABC染色的多克隆抗体c-fos抗兔大鼠购自北京中山金桥生物科技有限公司;即用型SABC套件购自武汉布德生物工程有限公司。冷冻切片在室温下平衡并水合，然后进行以下步骤。脑组织切片在0.01mol / L PBS中漂洗5分钟×3次，3％H 2 O 2漂洗10分钟，5％非特异性抗原封闭1小时并且在37℃下加入1：250的兔多克隆抗兔抗体。4℃孵育过夜5小时。滴加入生物素化的山羊IgG，并在潮湿的室中于37℃温育40分钟，逐滴加入SABC，并在30℃至37℃温育并最终显色。DAB持续20分钟。上述步骤在PBS中以0.01mol / L漂洗5分钟×3次。后，放入0.2％明胶中的萼片，风干，然后用常规梯度醇脱水，二甲苯是透明的，并将片剂密封。
性对照组与正常兔血清和PBS代替一抗孵育，对照组未发现阳性物质，即无特异性反应。像分析和统计分析分析使用Jetta 801形态学图像分析系统对大鼠BLA中c-fos阳性神经元的图像进行分析，收集5个切片。于每只动物，在40×10倍光学显微镜下计数每个切片的双侧BLA中c-fos阳性神经元的数目。用SPSS13.0软件分析数据并表示为平均值±标准偏差。过对独立样品的t检验进行显着性检验，p <0.05为统计学显着性。果桂花树木的基底核相对于图案定位（图1A，B）。光学显微镜下，在负荷下间歇游泳训练6周后，大鼠BLA的免疫反应神经元c-fos是圆锥形和椭圆形细胞，主要是大中型细胞。疫反应的产物是棕色的。低倍显微镜下，它是复合物的小起源并且染色是均匀的。主要位于神经细胞的细胞核中，也在细胞质中部分表达。部呈黄色或未着色。像分析和统计处理的结果如下（表1，图2至7）：在间歇性运动结束后，在c-fos中观察到大量c-fos阳性细胞。型组的BLA。常对照动物的相应部分仅显示c-fos蛋白的散发表达。歇运动后，大鼠BLA中c-fos蛋白的表达密度较低且分散，与对照组无显着差异（P> 0.05）（图2，3）;间歇运动后大鼠BLA中的c-fos蛋白质表达随时间增加（0.5小时<1小时<2小时）。2 h后，大鼠AB中c-fos蛋白的表达达到最大值，与对照组有显着差异（P <0.01）。（图4-6），然后大鼠BLA中c-fos蛋白的表达开始随时间降低。4小时时，c-fos蛋白的表达显着降低，但仍然大于对照组，具有显着差异（P <0.05）（图7）。1阳性的c-fos在BLA大鼠驱动间歇后游泳的原癌基因c-fos的可迅速通过外部刺激如神经递质，激素，神经冲动等触发的相关的信息响应和迹象[11]。正常情况下，c-fos基因在神经系统中的表达非常弱，并且参与生长，繁殖，分化，信息传递，人类学习，记忆和其他过程。理性的。生理刺激和病理学中可以瞬时诱导细胞中c-fos基因的表达[12]。c-fos转录的激活可以在5分钟内发生，通常在15和20分钟之间，并且c-fos mRNA可以在刺激后30-45分钟达到峰值。c-fos转录产生的成熟mRNA编码由380个氨基酸组成的核酸蛋白，相对分子量为6.2×10 4，称为Fos，与异二聚体形成的另一个立即早期基因c-jun的表达产物。合物：转录因子AP-1（激活蛋白-1）参与信号转导系统中不同效应酶的转录过程，调节其他基因靶蛋白的合成，以修饰其结构和功能神经元[14]。前，已经提出c-fos蛋白至少有三种表达模式：1）瞬时和快速表达，2）延迟表达，和3）组织特异性延长表达。[15]。c-fos的不同表达模型也对神经元有很大影响：c-fos的中度表达可以阻断细胞中的信号转导并产生某些死亡因子.C-fos的表达表达凋亡途径。与DNA损伤和修复有关，参与细胞周期的调节并具有保护作用，但不适当的过表达会干扰细胞核的修复功能，导致细胞凋亡。17。近的研究表明，作为特殊应激源的运动对c-fos的表达具有显着影响。步和强迫游泳可以增加脑内c-fos基因的表达[18~23]。Taeck-Hyun Lee研究显示，随着运动强度的增加，大鼠海马中c-fos基因的表达他也认为运动可以加强海马神经活动呈时间依赖性，而c-fos基因表达则先增加后减少。可能是由于大脑适应紧急刺激的变化[19]。Oladehin等人表明，中等强度的有氧运动不仅可以维持神经元活动，还可以作为影响神经系统运动过程的调节因子[23]。的作用机制可以与第二信使相关联，第二信使的引擎可以激活c-fos的表达。
前的研究证实，至少有三通第二信使参与c-fos基因的活化：cAMP的[24]，钙离子[25]和甘油二酯依赖性蛋白激酶（PKC）[25]。当的运动可以增加神经递质如在脑中[26]，这是发送对相关膜受体的细胞和行为之间信息的第一信使的突触前膜的多巴胺和5-羟色胺的浓度突触后。了诱导cAMP产生，c-fos基因含有CRE cAMP反应序列。外，运动还可以增加细胞内钙浓度，并且c-fos基因的较高调节序列含有抗钙元件（CaRE）转录调控元件，其可以调节蛋白质的表达。FOS。后，间歇性运动的间歇强度如何影响大鼠BLA中c-fos蛋白的表达以及它的诱导机制是什么？这是我们研究的目的。香环是在边缘系统一个显著皮层下，结构复杂，纤维的连接和功能非常普遍，主要包含三个主要核基团，中央木耳（CEA），基底外侧核（BLA）和内侧皮质。团（MeA）。中神经节横向基础，BLA，构成最大的核组桂花树芯（外芯桂花树木，基底节，副基底核），其含有大量的纤维穿透和传出，并在与情绪相关的学习和记忆中发挥重要作用。香核心含有肾上腺素能释放因子（CRF）[27]，这是压力参与的物质基础。
生理学研究表明，当给出诸如身体声音的外部刺激时，
桂花树来自桂花树木芯的神经放电活动得到改善[28]。C.V. Dayas和其他研究表明，声音刺激和免疫应激的应用将积极调节琼脂核心中c-fos基因的表达[29]。这项研究中，6周间歇驱动的后在负载下游泳，c-fos蛋白的大鼠的BLA表达比在任何时间对照组高，除了即时组其他组与对照组有显着差异。异（P <0.05）表明间歇游泳训练可以增加大鼠AB中c-fos蛋白的表达。歇训练方法是一种无氧训练方法，限制强度并严格调节运动和间歇持续时间，由于间歇期的存在，最高强度几乎贯穿始终运动期间可以重复几次，所以在力量和数量上都是如此。面保持在较高水平，能量供应和生理反应的特征严格区别于持续训练，静态训练甚至强化训练[30]。
们假设间隔训练中c-fos表达的上调可能与细胞内钙浓度的增加有关。间歇运动极端力的状态下，所述主体具有在氧在血液mouvement.Après脑缺氧，突触前膜被去极化的分压降低的缺氧，导致释放突触间隙中的谷氨酸（Glu）。结合到突触后膜的NMDA受体，引起G蛋白在细胞膜的构象的改变，由磷脂酶C（PLC）增加系统降解磷脂酰肌醇（PI）和增加三磷酸肌醇的水平（IP3）。胞内钙池，内质网和线粒体，提高细胞内钙离子的浓度和激活阳离子通道高度导通，使细胞外钙离子内流和激活鸟苷酸环（GC）。蛋白激酶（PKC），然后通过蛋白质的一系列磷酸化诱导蛋白质c-fos的表达[11]。然，一些研究表明，当细胞内钙离子浓度增加时，其形成与钙调蛋白（CAM）的复合物的Ca / CaM和磷酸化转录因子来启动c-fos基因的表达[31 ]。外，我们还在实验中观察到BLA中c-fos基因的蛋白质表达对时间非常敏感。歇训练结束时，大鼠BLA中c-fos蛋白的表达随时间迅速增加，c-fos蛋白的表达在2 h达到峰值，这是显着的。对照组不同（P <0.01）。后，大鼠BLA中c-fos蛋白的表达随着时间的推移开始下降，并且在4小时时，c-fos蛋白的表达显着下降，但仍然大于对照组（p <0.05）。析原因：1）在间歇训练的刺激下，大鼠BLA中的c-fos主要表现为早期短暂，在训练后数小时迅速表达，然后是结构基因继发子被激活并且自身由次级基因返回。抑制作用，晚期表达水平下降; 2）c-fos和c-jun基因中AP-1结合位点的存在可能会起到一定的反馈自我调节作用; 3）间歇训练不同于强力疲劳训练，虽然强度接近极限，由于存在间歇期，当有一定程度的短暂性缺血时，缺氧刺激不会引起脑损伤，形成缺血和缺氧引起的代偿作用。每次训练期间的有限间隔期间，已形成的补偿效应继续得到维持甚至加强，直到下一次训练开始。果，大鼠BLA神经元中Ca2 的浓度没有增加太多，如在强化训练的情况下，导致钙超载[32]，导致基因的过表达。FOS。之，间歇性运动可引起大鼠基底外侧核中c-fos表达的变化，并显示出一定的规律性。此，我们可以不时地将相关的靶基因解释为运动后c-fos表达的主要脑区的功能，不同时间的表达强度以及由此诱导的蛋白质的表达。种基因，对于防止极限力后的病理损伤很重要。
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